基因敲除原理是(基因敲除原理和应用)

Cas9首先与crRNA和tracrRNA结合形成复合物，然后通过PAM序列与DNA结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合物结构，然后切割靶DNA双链使DNA双链断裂，从而达到基因敲除的效果。

通过基因工程手段，对crRNA和tracrRNA进行改造并连接在一起，获得sgRNA（单引导RNA）。融合RNA具有与野生型RNA相似的活性，但由于其结构简化，更便于研究人员广泛使用。通过将最初表达的sgRNA与最初表达的Cas9连接起来，可以获得可以同时表达它们两者的质粒，并且可以通过将其转染到细胞中来操纵靶基因。