pcr。样本之间的交叉污染、PCR试剂的污染、PCR扩增产物的污染以及实验室中克隆质粒的污染。
1.标本之间的交叉污染:标本的污染主要包括采集标本的容器的污染，或密封不整齐或标本粘附在容器外造成的交叉污染；样本核酸模板提取过程中，因吸样枪污染造成样本间污染；一些微生物标本，尤其是病毒，可随气溶胶传播或形成气溶胶，造成相互污染。
2.PCR试剂污染:主要是由于PCR试剂制备过程中PCR核酸模板对加样枪、容器、双蒸水等溶液的污染。
3.PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最重要和最常见的污染问题。由于PCR产物的拷贝数较大（一般为1013拷贝/ml），远远高于PCR检测几个拷贝的极限，因此极少量的PCR产物污染就可能引起假阳性并形成假阳性。气溶胶污染是最可能的PCR产物污染形式。当/【/k0/】气体摩擦液体表面时会形成气溶胶。当操作过程中剧烈摇动反应管时，打开盖子、吸取样品以及被污染的注射枪反复吸取样品时，会形成气溶胶并造成污染。据计算，一个气溶胶粒子可以包含48，000个拷贝，因此它所造成的污染是一个值得特别关注的问题。
4.实验室中克隆质粒的污染:这个问题在分子生物学实验室和一些使用克隆质粒作为阳性对照的实验室中也很常见。由于克隆质粒在单位体积中的含量相当高，此外，在纯化过程中需要更多的器具和试剂，并且由于活细胞生长和繁殖的简单性，活细胞中的质粒具有强大的生命力。污染的可能性也很大。
聚合酶链式反应（PCR）是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术，可视为一种特殊的体外DNA复制。PCR最大的特点是可以大量增加少量的DNA。因此，只要能分离出一点点DNA，就可以通过PCR扩增并进行比较。这也是痕迹证据的力量。1983年美国的穆利斯首次提出了这一想法，1985年穆利斯发明了简单的DNA扩增方法，这意味着PCR技术的真正诞生。到目前为止，2013年，PCR已经发展到第三代技术。1976年，我国科学家钱嘉云发现了一种稳定的Taq DNA聚合酶，这也为PCR技术的发展做出了基础性贡献。PCR利用DNA在95℃的高温下在体外变性变成单链，并在低温下（通常约60°C），根据碱基互补配对的原理将引物和单链结合，然后将温度调节到DNA聚合酶的最佳反应温度（约72°C），DNA聚合酶沿着从磷酸到五糖的方向合成互补链（5-3）。基于聚合酶的PCR仪实际上是一个温度控制装置，可以很好地控制变性温度、复性温度和延伸温度。
